Co-dhùnadh air susbaint searbhag ocsaileach ann am measan is glasraich le cromatagrafaidheachd leaghaidh àrd-choileanaidh (HPLC)

Co-dhùnadh air searbhag ocsaileach Susbaint ann am Measan is Glasraich le Cromatagrafaidheachd Leaghan Àrd-choileanaidh (HPLC)
1. Prionnsabal Deuchainneach agus Dealbhadh Modh-obrach
’S e searbhag organach cumanta a th’ ann am measan is glasraich, agus tha buaidh dhìreach aig susbaint searbhag oxalic air blas is luach beathachaidh bìdh. Tha an deuchainn seo a’ cleachdadh cromatagrafaidheachd leaghaidh àrd-choileanaidh ìre-aisig (RP-HPLC). Fo chumhachan ìre gluasadach searbhagach, tha searbhag oxalic air a sgaradh aig bonn na loidhne bho stuthan a tha a’ cur bacadh air a’ phròiseas le bhith a’ cleachdadh colbh cromatagrafaidheachd C18. Tha lorgaire ultraviolet air a shuidheachadh aig 210 nm air a chleachdadh airson mion-sgrùdadh cainneachdail, stèidhichte air feartan gabhail a-steach UV nam buidhnean carboxyl ann am moileciuilean searbhag oxalic.
2. Lùb àbhaisteach agus ullachadh sampall
Cleachdar dòigh caolachaidh caisead gus fuasglaidhean àbhaisteach ullachadh: tomhais 25.0 mg de dh’aigéad oxalic dà-hydrate gu ceart agus caolaich gu 25 mL le uisge fìor-ghlan gus fuasgladh stoc 1 mg/mL fhaighinn. Tha seo air a chaolachadh mean air mhean ann an sreath de fhuasglaidhean àbhaisteach aig 50, 100, 200, 400, agus 800 µg/mL, le gach dùmhlachd air a stealladh ann an trì leth-bhreac.
Airson ullachadh sampall, thathar a’ cleachdadh às-tharraing le taic bho mhicro-tonn: cuideamaich 5.00 g de homogenate measan/glasraich, cuir 10 mL de fhuasgladh searbhag haidreaclórach 0.1 mol/L ris, làimhsich aig 60°C leis a’ mhicro-tonn airson 10 mionaidean, sìolaich tro chriathrag membran 0.45 µm, agus cruinnich an filtrate airson deuchainn.
3. Leasachadh nan Cumhaichean Cròmatagrafaigeach
Is e siostam bufair potasium dihydrogen phosphate bufair 0.01 mol/L (pH 2.5)–acetonitrile (95:5) a th’ anns an ìre gluasadach, le ìre sruthadh de 0.8 mL/min agus teòthachd colbh de 35°C. Le bhith ag atharrachadh co-mheas an acetonitrile, chithear nuair a bhios an ìre organach nas àirde na 10%, gu bheil ùine gleidhidh searbhag oxalic a’ giorrachadh gu nas lugha na 3 mionaidean, ach gu bheil an ìre as àirde de dh’earball a’ tachairt. Fo na cumhaichean deireannach as fheàrr, tha ùine gleidhidh searbhag oxalic 4.2 mionaidean, a’ coileanadh dealachadh iomlan bho searbhag citreach agus searbhag malic faisg air làimh (rùn > 1.5).
4. Dearbhadh Modh-obrach
Tha dearbhadh raoin loidhneach a’ sealltainn deagh dhàimh loidhneach eadar farsaingeachd na stùice agus dùmhlachd anns an raon 10–1000 µg/mL (R² = 0.9993). Is e 0.5 µg/mL an crìoch lorg (LOD), air a dhearbhadh leis an dòigh co-mheas comharra-gu-fuaim. Ann an deuchainnean ath-aithris, is e 1.8% an RSD airson sia dearbhaidhean ath-aithris den aon sampall spionag. Bidh deuchainnean ath-bheothachaidh spìc aig trì ìrean (80%, 100%, agus 120%) a’ toirt a-mach ath-bheothachaidhean cuibheasach de 98.2%, 102.4%, agus 97.8%, fa leth, a’ coinneachadh ris na riatanasan airson mion-sgrùdadh cainneachdail.
5. Mion-sgrùdadh air fìor shamhlaichean
Chaidh sia measan is glasraich a bha rim faighinn gu malairteach a dhearbhadh: spionag (356 ± 12 mg/100 g), soilire (215 ± 9 mg/100 g), tomato (18 ± 2 mg/100 g), ubhal (6 ± 1 mg/100 g), banana (gun lorg), agus broccoli (89 ± 5 mg/100 g). Tha coimeas leis an dòigh-obrach àbhaisteach nàiseanta (GB 5009.277-2016) a’ sealltainn gu bheil an diall coimeasach eadar an dà dhòigh nas lugha na 5%, a’ dearbhadh earbsachd na dòigh-obrach seo. Gu sònraichte, tha an dòigh HPLC a’ nochdadh cugallachd nas àirde na dòighean titration traidiseanta nuair a thathar a’ dèanamh anailis air sampallan le susbaint ìosal.
6. Prìomh Notaichean
Cùm smachd teann air luach pH rè ro-làimhseachadh an t-sampall. Ma tha pH an earrainn nas àirde na 3, bidh sileadh calcium oxalate ag adhbhrachadh toraidhean deuchainn ìosal. Bu chòir an ìre gluasadach ullachadh ùr gach latha gus casg a chuir air sileadh salainn agus bacadh colbh. Às deidh gach 20 stealladh, nigh an colbh le acetonitrile-uisge (30:70) airson 30 mionaid gus casg a chuir air crìonadh èifeachdas colbh. Airson sampallan anns a bheil pigment (me, càl purpaidh), thathas a’ moladh ceum glanaidh às-tharraing ìre chruaidh a chur ris mus tèid a stealladh.
7. Stiùiridhean Iarrtais is Leudachaidh
Faodar an dòigh seo a leudachadh gu bhith a’ lorg searbhag oxalic ann an sampallan bith-eòlasach leithid fual agus fuil. Le bhith ag atharrachadh co-dhèanamh na h-ìre gluasadach (me, a’ cur tetrabutylammonium hydroxide ris), faodar searbhag oxalic agus a metabolites a dhearbhadh aig an aon àm. Còmhla ri lorgaire speactramaitreachd tomad, faodar dòigh lorg lorg nas mionaidiche a stèidheachadh. Ann an gnìomhachas giullachd bìdh, faodaidh an dòigh seo taic dàta cudromach a thoirt seachad airson taghadh sheòrsachan searbhag oxalic ìosal agus airson pròiseasan còcaireachd a dhèanamh nas fheàrr.